高效液相色谱电喷雾质谱快速鉴定粉葛中C-苷及O-苷同分异构体

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摘 要 采用高效液相色谱（二极管阵列）/电喷雾质谱联用系统（HPLCPDAESIMSn）快速鉴定中药粉葛中C苷及O苷异黄酮同分异构体。选用Hypersil Gold C18 （150 mm×2.1 mm×3 m）色谱柱, 以水（含0.1%甲酸）乙腈为流动相进行梯度洗脱, 研究了粉葛中11种异黄酮类化合物的正离子一级、多级质谱及PDA光谱；分析鉴别了两对同分异构体；预测了两种未知微量成分结构, 建立了区分粉葛中异黄酮类化合物同分异构体的电喷雾质谱新方法。

关键词 粉葛； 高效液相色谱电喷雾质谱； 同分异构体； 源内碰撞诱导解离

1 引 言

粉葛（Radix puerariae thomsonii）为豆科植物甘葛藤（ Pueraria thomsonii Benth）的干燥根, 味甘, 辛、凉,有解肌退热、透疹、生津止渴、通经活络之功效 \。粉葛自古与野葛同作葛根用。研究发现, 粉葛与葛根（野葛）HPLC指纹图谱\及临床应用\存在较大差别, 2005版中国药典首次将粉葛与葛根（野葛）分列作为中药材记载。粉葛中主要成分为异黄酮类化合物, 大部分以苷的形式存在, 主要包括：葛根素、3′羟基葛根素、大豆苷等\, 其主要结构见表1。该类化合物中存在多对同分异构体, 主要分为碳苷和氧苷两类化合物。同分异构体结构相似, 极性相近, 分离难度大。分离和鉴别中药中同分异构体化合物, 一直是药物分析的难题。

高效液相色谱质谱联用（HPLCESIMS）技术结合了色谱与质谱的优点, 可有效分析复杂混合物中的单个和多个组分\。文献\采用高效液相色谱（二极管阵列）/电喷雾质谱联用系统（HPLCESIMS）方法分析葛根中异黄酮类化合物。但对粉葛中化合物质谱分析尚未见报道。本研究采用HPLCPDAESIMSn技术鉴别分析了粉葛中C苷和O苷两类化合物, 建立区分粉葛中异黄酮类化合物同分异构体的电喷雾质谱方法。表1 粉葛中主要异黄酮类化合物

谱配有电喷雾离子源（ESI）；高效液相色谱仪系统（Surveyor HPLC）包括 Surveyor PDA Plus检测器、Surveyor AutoSample Plus自动进样器、Surveyor MS Pump四元泵； Xcalibur 2.0化学工作站软件； Mass Frontier 6.0软件。

粉葛药材购于合肥市当地药店, 经安徽中医学院药学院中药教研室王德群教授鉴定为豆科植物甘葛藤（ Pueraria thomsonii Benth）的干燥根；葛根素对照品（中国药品生物制品检定所, 批号 0752200509）; 乙腈、甲酸（色谱纯, 美国Merck公司）, 实验用水为亚沸蒸馏水。

2.2 样品处理

2.2.1 对照品溶液配制 准确称定葛根素对照品1.2 mg, 置于10 mL容量瓶中, 以甲醇定容, 摇匀, 作为储备液。准确移取1.00 mL储备液, 以甲醇定容至10 mL, 经0.22

2.2.2 供试品溶液配制 取粉碎过40目筛粉葛药材0.5 g（粒径＜0.45 mm）, 准确称定, 置平底烧瓶中, 加入50 mL甲醇水（2∶1, V/V）, 加热回流30 min, 用甲醇水（2∶1, V/V）补足重量, 过滤, 取续滤液1.0 mL, 用甲醇定容至 10 mL.