maspin与肺癌相关性的研究

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【摘要】目的：探讨maspin与肺癌的相关性。方法：采用免疫组化技术检测maspin在肺癌及正常肺组织中的表达，TdT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡。结果：肺癌组maspin表达较对照组明显减弱，细胞凋亡亦显著减少，两者呈正相关。结论：maspin表达下调可能通过减少细胞凋亡导致肺癌发生。

【关键词】maspin；肺癌；免疫组化；凋亡；TUNEL

肺癌是目前严重危害人类健康的恶性肿瘤之一，其具体发病机制尚不明确。研究发现抑癌基因maspin可抑制多种肿瘤的发生和发展，现就其与肺癌的相关性探讨如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料：选取2002～2007年我院18例肺癌手术患者，其中男12例，女6例，年龄37～62岁。肿瘤均为单发，手术中切取部分肿瘤组织及同侧远离肿瘤的正常肺组织，常规石蜡包埋切片。

1.2 研究方法：采用免疫组化技术检测maspin表达：石蜡切片常规脱蜡至水，3% H2O2室温孵育20 min，高压抗原修复，滴加山羊血清，室温下孵育20 min，滴加一抗工作液，4 ℃冰箱过夜，滴加生物素标记的二抗， 37 ℃孵育20 min，加SABC-POD 37 ℃ 30 min，DAB显色，苏木素复染，常规脱水、透明、封片。每张切片任取5个视野，观察染色强度，未着色为0分，阳性颗粒呈浅黄色记1分，浅棕色记2分，棕黄色记3分，棕褐色记4分;计数阳性细胞，无阳性细胞为0分，阳性细胞占1％～15％记1分，16％～50％记2分， 51％～85％记3分， 86％～100％记4分。阳性指数=（阳性细胞染色强度分值×阳性细胞百分数分值）/2。

TUNEL法检测细胞凋亡: 切片常规脱蜡至水， 3％H2O2封闭10 min，蛋白酶K 37 ℃消化8 min，滴加标记液(TdT和DIG-dUTP各1 ?滋l加入18 ?滋l标记缓冲液)37 ℃孵育2 h，滴封闭液室温30 min，加生物素化抗地高辛37℃ 30 min，加SABC-POD 37 ℃ 30 min， DAB显色，苏木素轻度复染，常规脱水、透明、封片。每张切片任意选取5个视野，分别计数每个视野细胞核数及凋亡细胞核数，取均值。凋亡指数AI(%)=凋亡阳性的细胞核数/总计数的细胞核×100。

1.3 统计学方法：SPSS11.5统计软件包处理数据，采用t检验和Pearson相关分析法。

2 结果

2.1 maspin蛋白表达阳性细胞胞浆染色：正常组免疫组化阳性指数4.69±1.51，肺癌组免疫组化阳性指数3.18±1.47，后者较前者表达明显减弱，两组比较差异有显著性，P

2.2 凋亡细胞胞核呈棕褐色颗粒状：正常组凋亡指数（13.02±5.41）%，肺癌组凋亡指数（8.39±3.28）%，后者较前者细胞凋亡明显减少，两组比较差异有显著性，P

2.3 肺癌组：分析肺癌组maspin免疫组化阳性指数与细胞凋亡指数的相关性，两者呈正相关，P=0.000，r=0.734。

3 讨论

maspin(mammaryserine protease inhibitor)是一种Ⅱ类肿瘤抑制基因，于1994年Zou等[1]通过消减杂交法和差异显示分析技术，比较正常乳腺组织与乳腺癌组织基因差异表达时发现， 位于人染色体18q21.3～q23区，cDNA序列全长2584 bp。其基因编码产物属丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族(serpin)卵清蛋白亚族， 分子质量42 ku，由375个氨基酸残基组成， 3个β折叠(分别称为A，B，C折叠)和一个反应中心环(reactive center loop，RCL)或称反应位点环(reactivesite loop，RSL)形成其三级结构的主要构型，其中RSL靠近羧基末端，具有高度可曲性，易受蛋白水解酶影响发生肽键断裂，导致maspin蛋白活性丧失，因此其构象的稳定是maspin保持其生物功能的关键[2]。

大量研究发现[3~5]，maspin在乳腺、前列腺、胃肠道、角膜、卵巢等人体器官组织中有高水平表达，而在相应的恶性肿瘤中表达下调、不表达或过度表达，认为maspin的异常表达与恶性肿瘤的发生密切相关。目前，有关maspin与肺癌相关性的研究相对较少，本实验发现maspin在正常肺组织中中度表达，而在肺癌组织中的表达明显减弱，两者差异有显著性，因此可以推测maspin的表达下调可能是导致肺癌发生的原因之一。

迄今为止， maspin抗肿瘤的具体作用机制尚未阐明。相关研究主要集中在下述方面：（1）对细胞凋亡的影响；（2）对血管新生的抑制；（3）对黏附分子的作用；（4）maspin表遗传学(epigenetics)调节。本实验提示，肺癌组织中细胞凋亡明显减少，且其凋亡率与maspin的表达呈正相关，有统计学意义，因此我们认为maspin的表达下调可能引起细胞凋亡减少、增殖失控从而导致肺癌的发生。有研究者认为[6]，maspin通过选择性控制Bax/Bcl-2的蛋白稳定性介导了凋亡，但有关其在肺癌组织中影响细胞凋亡的具体作用机制还有待进一步探讨。

参考文献：

[1] Zou Z，Anisowicz A，Hendrix MJ，et al. Maspin，a serpin with tumor-suppressing activity in human mammary epithelial cells[J]. Science，1994，265(5180):1893.

[2] Zou Z，Gao C，Nagaich AK，et al.p53 regulates the expression of the tumor suppressor gene maspin[J].J Biol Chem，2000，275(9):6051.

[3] Maass N，Teffner M，Rosel F，et al. Decline in the expression of the serine proteinase inhibitor maspin is associated with tumour progres-sion in ductal carcinomas of the breast[J].J Pathol，2001，19(3):321.

[4] Chen Z，Fan Z，McNeal JE，et al. Hepsin and maspin are inversely expressed in laser capture microdissectioned prostate cancer[J].Urol，2003，169(4):1316.

[5] 黄秋实，史成章，王红建，等. maspin及uPA在结肠癌组织中的表达及其临床意义[J].肿瘤基础与临床，2007，20(3):219.

[6] Zhang W，Shi HY，Zhang M.Maspin overexpression modulates tumor cell apoptosis through the regulation of Bcl-2 familyproteins[J].BMC Cancer，2005，5(1)：50.

收稿日期：2007-01-14