武汉市宠物犬狂犬疫苗免疫效果评价

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摘要：为评价武汉市内宠物犬狂犬疫苗的免疫情况，为制定狂犬病的防制对策提供依据，采用间接ELISA法，对325只宠物犬进行狂犬病毒抗体捡测。结果在325只被检测的宠物犬中，抗体阳性的犬有153只，占47.1%，抗体阴性的犬有172只，占52.9%；其中抗体阳性犬只有38只犬能够产生保护性狂犬病毒抗体（即抗体强阳性），占总数的11.7%；假阳性或潜在感染狂犬病毒的宠物犬7只，占2.2%。

关键词：宠物犬；狂犬疫苗；免疫效果

中图分类号：S852.5+2 献标识码：A 文章编号：1007-273X（2013）02-0026-02

狂犬病是由狂犬病毒引起的一种高致死性人畜共患性疾病，近几年我国狂犬病的发病数呈持续上升之势，居世界第二位，仅次于印度[1]。2003年以来的统计显示，在国家27个法定传染病中，狂犬病死亡数和病死率位居榜首。文献显示[2]，在亚洲，由犬引起的狂犬病占到98%，而由猫及其他动物引起的占2%。宠物犬是目前与人类接触最密切的动物，为了解宠物犬狂犬疫苗免疫接种的效果，笔者与同事于2004年6月对武汉市内的宠物犬进行了免疫效果检测和评价工作，时隔多年，经过整理当时检查结果，现报告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 宠物犬 来自武汉市内各城区的宠物饲养家庭，通过新闻媒体消息，以完全自愿的形式接受狂犬病毒IgG抗体检测。

1.1.2 试剂 根据国家科技部科技基础专项（项目编号2002DEA20023）任务要求研制的“实验犬狂犬病毒抗体ELISA检测试剂盒”产品（湖北省疾病预防控制中心生产，产品专利申请号20031011 1497.6）。

1.1.3 主要仪器与器械 酶标仪（BIO-RAD Model NO.550），常规加样器，宠物犬专用固定设备及常规采血工具，离心机（上海安亭科学仪器厂生产）等。

1.2 方法

1.2.1 宠物犬背景调查方法 在采样时按照设计的调查表，收集宠物犬的种类、来源、年龄、性别及免疫接种疫苗的种类和免疫方法，为狂犬病流行因素调查提供依据。

1.2.2 宠物犬固定方法 在犬主人的配合下，用犬专用固定设备控制犬头颈部，防止犬突然攻击采样人员，然后按照常规方法[3]对犬前肢皮下静脉采血2 mL左右，并分离血清。

1.2.3 检测操作方法 按照狂犬病毒抗体ELISA检测试剂盒使用说明书进行操作。取出酶标板，每孔滴加样品稀释液100 ？滋L，阳性血清、阴性血清和空白对照孔不加稀释液精确吸取待检血清l ？滋L ，加入相应的样品孔中，同时取阳性、阴性血清100 ？滋L加入相应的对照孔中，空白对照孔不加。37 ℃温育30 min倒掉孔中的反应液，拍干，用洗涤液洗板5次，拍干每孔滴加酶结合物100 ？滋L，37 ℃温育30 min倒掉孔中的反应液，拍干，用洗涤液洗板5次，拍干每孔滴加底物A、底物B各一滴（50 ？滋L），37 ℃作用15 min，观察结果。

1.2.4 结果判定方法 目测：待检样品孔显蓝色判为阳性。机测：每孔滴加终止液一滴（50 ？滋L），用酶标仪测每孔OD450 nm值。Cutoff=2.1×阴性对照平均OD值（阴性平均值不到0.1按0.1计算）。样品孔OD值≥Cutoff值判为阳性。

2 结果

2.1 宠物犬背景情况

本次检测工作，共有325只宠物犬接受采样检测。这些犬来自武汉三镇，品种多、体型各异，各年龄段均有，其中武昌区有237只犬、汉口有48只、汉阳30只、地址不详的有10只。按年龄段分：1岁以下犬（不含1岁）90只、1～5岁（不含5岁）215只、5岁以上（含5岁）15只、年龄不详的有5只。这些犬大部分采用国产多联疫苗免疫，少部分采用进口疫苗和狂犬疫苗单价苗免疫。

2.2 检测结果

在325只被检测的宠物犬中，抗体阳性的犬有153只，占47.1%，抗体阴性的犬有172只，占52.9%；其中抗体阳性的犬中只有38只能够产生保护性狂犬病毒抗体（即抗体强阳性），占总数的11.7%；假阳性或潜在感染狂犬病毒的宠物犬7只，占2.2%。其中1岁以下小龄犬同年龄段阳性率只有2.2%，1～5岁中青年犬同年龄段阳性率为14.9%，老龄犬为6.7%，中青年犬的抗体阳性率要高于小龄犬和幼犬，结果见表1。

3 小结与讨论

这次接受狂犬病毒抗体检测的宠物犬来自武汉三镇非常喜爱宠物的家庭，并且非常重视宠物犬的狂犬疫苗预防接种工作，本应该体现出较好的检测结果，之所以不能达到预期的效果。可能与以下因素有关：宠物犬的预防接种有误区，以为犬的五联、六联或七联疫苗能够达到预防狂犬病的效果，理论上来分析，在防止传染病的问题上，预防多种疫病的疫苗联在一起，彼此之间是有干扰作用的，尤其是预防狂犬病，使用单价狂犬疫苗肯定比使用多价（如犬的五联、六联或七联）疫苗的效果好。我们通过动物实验也充分证明了这一点。

中青年犬的抗体阳性率之所以高于小龄犬和幼犬，是因为犬经过长期多次预防接种后，具备主动产生狂犬病毒抗体的免疫应答机制，只要每年按时、按程序接种疫苗，是可以产生有效的保护性狂犬病毒抗体的，接种三次狂犬疫苗的犬，其抗体阳性率高于接种两次的犬的结果也证明了这一点。而由于送检的老龄犬数量较少，并没有真实反应出老龄犬的免疫情况。

市面上使用的犬五联、六联或七联疫苗，是以预防犬瘟热和细小病毒病为主，预防狂犬病通常摆在第三位，因为前两者疾病主要是通过呼吸道和消化道感染发病，发病率非常高，治疗的效果差，但预防效果好；而后者是通过动物之间相互咬伤才可能感染发病，这种机会比较小，上述检测结果也证明了这一点。

接受狂犬病毒抗体检测的宠物犬均来自爱宠家庭，在预防接种、动物福利待遇和卫生条件方面比较优越，但其宠物犬产生狂犬病毒抗体的比率和抗体水平并不高，据此推测，武汉市养宠物的一般家庭，其宠物犬能够产生狂犬病毒抗体的比率和抗体水平可能更低。

在325只被检测的宠物犬中，有7只没有接种任何狂犬疫苗但显示有抗体产生，占2.2%，这可能与检测方法有关，出现假阳性结果，也有可能这些犬处于狂犬病毒感染阶段，需要进一步观察，值得特别注意。

参考文献：

[1] 张永振，肖末接，孙玉辉，等.中国1984～2002年狂犬病流行情况及防制对策[J].中国流行病杂志，2003，24（10）：883～886.

[2] 王显军.狂犬病的流行病学研究[J].山东卫生，2003，（11）：52-53.

[3] 孙敬方.动物实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2001.