香菇不同菌株的酯酶同工酶多态性分析
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香菇(Lentinusedodes)又称香蕈、厚菇、花菇等。在分类学上，隶属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、侧耳科、香菇属。香菇是世界第二大食用菌，也是我国特产之一。含有高蛋白、低脂肪、多糖、多种氨基酸和多种维生素等营养物质，具有提高人体免疫力，延缓衰老，防癌抗癌，降血压、降血脂、降胆固醇等作用。
近年来，我国香菇生产形势喜人，随着人工栽培香菇数量的迅速发展，新的香菇菌种也不断涌现。但由于我国食药用菌品种登记制度尚未健全，菌种比较混乱，同名异物或同物异名的情况非常普遍。不但给菌种生产管理带来难度，同时给从事香菇栽培的农户及相关企业造成一定的经济损失，成为我国香菇开发和产业发展中的严重障碍。同工酶电泳分析在食药用真菌的分类鉴定和育种中的应用日益广泛，国内外都有类似的研究报道。本文对目前市场上17个香菇的主要栽培品种进行了酯酶同工酶分析，旨在为香菇菌株的良种选育、种性鉴定及菌种管理等工作提供科学依据。
一、材料和方法
1、试验材料
(1)供试菌株供试17个香菇菌株，X1、X5～X7、X9-X15由辽宁省农业科学院食用菌研究中心提供，X2、X4、X8引自新宾多种经营局，X3引自丹东林科院，X16、X17引自抚顺市农业研究所。
(2)培养基马铃薯(去皮)200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，琼脂20g，木屑15g，麸皮15g(木屑和麸皮要浸出的液体)，水1000mL。
(5)主要试剂分离胶缓冲液(pH8.9)，分离胶贮液，过硫酸铵溶液(现用现配)；浓缩胶缓冲液(pH6.7)；浓缩胶贮液(pH6.7)；四甲基乙二胺；电极缓冲液Tris-Gly；酯酶染色液。
2、样品的制备
将17个香菇品种分别接入斜面培养基上，25℃下黑暗培养15d后，小心刮取表面的菌丝体，用清水清洗3次，置吸水纸上吸去多余水分。称重0.5g后移至离心管内(1.0mL)，在-20℃下冰冻24h后，加入等量研磨液和少量石英砂，冰浴下研磨成匀浆，4℃离心(10000r／min)20min，取上清液在-20℃下保存备用，电泳前4℃解冻。
3、电沫
采用垂直平板聚丙烯酰胺电泳法，将样品提取液加入等体积的40％蔗糖溶液，点样量为10μL，溴酚兰作电泳指示剂。在4℃下电泳，初期电压为每板100V，当溴酚兰指示剂进入分离胶后电压升为每板150V，待指示剂迁移至距末端1cm左右处停止电泳。
4、酯酶染色
电泳完成，迅速取下胶板，用蒸馏水冲洗后放人酯酶同工酶染色液中25℃下30min。待显示出清晰酶带后取出，再用蒸馏水漂洗数次，用7％～10％醋酸脱色固定，4℃保存。
5、数据处理
测量酶谱带迁移距离，并计算出酯酶同工酶相对迁移率(Rf)，扫描存图。采用DPS数据处理系统软件，利用0―1数据系统聚类的最短距离法对数据进行聚类分析，建立聚类树状图。
二、结果与分析
1、酯酶同工酶谱带
17个香菇品种菌丝体酯酶同工酶在酯酶图谱上表现不同，电泳图谱见图1。
17个香菇菌株在酶谱上有十分丰富的表达，整个试验共检测出14条酶带。分别为3～10条，多为6、7条。其中Rf(相对迁移率)0.472、0.509、0.547为15个菌株所共有，可以认为是香菇的基础酶谱带。个别菌株有特征酶带，如Rf0.377是X8菌株的特征带。X2与X3、X4与X5、X6与X7、X16与X17这些菌株间酶带基本相同，只是宽窄、深浅有所不同，说明酶的活力不同，菌株间具有相同的遗传基础。
利用DPS数值处理系统软件对酶带进行聚类系统分析，见图2。结果表明，香菇在相异系数为33％时分为4类：第1类包括X1、X2、X3、X14、X16、X17、X15、X4、X5，第2类包括X8，第3类包括X9、X13、X10、X11、X12，第4类包括X6、X7。聚类分析与形态特征基本趋同。
三、结论与讨论
同工酶是指具有相同或相似的催化功能但酶分子的结构却不同的一组酶。同工酶酶谱主要是有编码的各条酶带的基因所直接决定的，它所表达的信息是分子水平上的信息。同工酶分析作为分子遗传标记技术之一，不仅被广泛用于动植物的遗传分析、生理生化研究，而且被作为化学分类的重要指标引进真菌的分类鉴定研究中，它弥补了菌落形态与颜色、孢子形态、子实体形态等传统真菌分类的不足，且简单易行，已逐渐成为该领域常用而重要的工具，特别是在属内种间以及品种之间的分类鉴定中是非常有效的。
不同香菇菌株的酯酶同工酶酶谱之间既有某些相同点，即基础酶谱带，又各自具有自身的特征，即特征酶谱带，反映出菌株间的相互联系与区别。根据文献所述，同工酶带越多，品系越进化的观点，多一条区带，则多一个成分，就多一份适应能力，理应是进化的表现，这为香菇优劣的鉴定提供依据。
酯酶作为一个生化指标，其差异能够反映出供试菌株在遗传特性上的某些差异，但培养条件的差异会导致酯酶同工酶的明显差异，因而在利用酯酶同工酶电泳技术进行食用菌分类或鉴定时，试验材料必须以同样的条件获得。