HPLC法测定盐续断配方颗粒中木通皂苷D的含量
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇HPLC法测定盐续断配方颗粒中木通皂苷D的含量范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
【摘要】 目的：建立盐续断配方颗粒中木通皂苷D的定量分析方法。 方法：采用高效液相色谱法定量木通皂苷D，色谱柱：Agilent C18反相柱（5μm×250 mm×4.6 mm），流动相：乙腈-水（35：65），柱温为30 ℃，流速：1.0 mL/min，检测波长：212 nm。 结果：hplc法测定结果显示，色谱峰形好，分离度高，阴性对照无干扰。木通皂苷D在0.979～19.6μg（r＝1）呈良好的线性关系；供试品在48h内稳定（RSD＝2.20％）；该方法精密度高（RSD＝1.69％），重复性良好（RSD＝0.95％），平均加样回收率为100.14％（RSD＝2.06％）。 结论：所建立的方法适合作为盐续断配方颗粒的含量测定方法。
近年来，我国绝大多数的医院掀起“免煎中药”的热潮。所谓“免煎中药”，是把传统中药材进行深加工，不保留药材的外形，通过水煎煮工艺提取有效成分，制成的一种便于医院药剂科配伍、利于患者携带和服用的颗粒剂中成药。盐续断配方颗粒，为深圳三九医药股份有限公司生产的其中一种配方颗粒剂，在国内医院广泛应用。盐续断，为续断药材的炮制品，加强了药材本身续筋骨的功效，临床上用于肝肾不足，腰膝酸软，风湿痹痛，跌扑损伤，筋伤骨折等，质量标准收载于《中国药典》2010年版一部[1]。然而，盐续断配方颗粒却缺乏质量标准。因此，为有效地控制该制剂的质量，本文采用高效液相色谱法（HPLC）对盐续断配方颗粒中的木通皂苷D进行含量测定。该方法操作简便、重现性好、专属性强，灵敏度高，结果科学准确，适合作为该品种的含量测定方法。具体研究如下。1
仪器与试药
高效液相色谱仪（生产厂家：美国Agilent公司；型号：Agilent1200系列），电子天平（Sartorius BP210S），超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，400W/40kHz）；盐续断配方颗粒（批号：1007221S、1007261S、1007291S，由深圳三九医药股份有限公司生产并提供）；木通皂苷D对照品（批号为111685-200802，购买于中检所）；乙睛为色谱纯（瑞典奥普公司），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。2
方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent C18反相柱（5μm×250 mm×4.6 mm）；流动相为乙腈-水（35：65）；流速为1.0 mL/min；柱温为30 ℃；检测波长为212 nm；进样量为10 μL。在此条件下，理论塔板数按木通皂苷D峰计算不得低于3000，木通皂苷D峰与相邻的其他峰的分离度应大于2.0。木通皂苷D对照品、盐续断配方颗粒样品色谱图见图1。
图1 木通皂苷D对照品（A）、盐续断配方颗粒（B）的HPLC图谱2.2 对照品溶液的制备 取木通皂苷D对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.8mg的溶液。精密量取3ml，置5ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。2.3 供试品溶液的制备 取适量本品，研细，取约0.5g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率400W，频率40KHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。2.4 线性关系考察 分别精密吸取同一份对照品溶液（每1ml约含木通皂苷D 0.5mg）2、5、10、15、20、40μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值对木通皂苷D进样量进行回归处理，分别得回归方程为y＝257.94x-0.8237，相关系数r＝1。结果表明，木通皂苷D在0.979～19.6μg的范围内时与峰面积有良好的线性关系。2.5 精密度试验 取同一份供试品溶液（批号：1007111S），在上述色谱条件下重复进样6次，测定，计算木通皂苷D峰面积的RSD为1.69％，结果表明，该方法精密度良好。2.6 稳定性试验 取同一批样品（批号：1007111S），依法制备后分别在0、4、8、12、24、48小时测定木通皂苷D的含量。结果发现供试品溶液在48小时内稳定（RSD%=2.20%）。2.7 重复性试验 取同一批样品（批号：1007111S）依法平行制备6份，测定木通皂苷D的含量。结果木通皂苷D平均含量为44.20 mg/g（RSD%=0.95％），表明该方法重复性良好。2.8 加样回收率试验 取同一批样品（批号：1007111S）9份，按表1要求分别加入适量样品并精密称定，按上述供试品制备方法和色谱条件测定。结果表明该方法准确度高（见表1）。
表1
加样回收率试验结果2.9 样品测定 分别取3批不同批号的盐续断配方颗粒，按上述供试品制备方法和色谱条件进行测定木通皂苷D的含量。结果分别为：44.05mg/g（批号：1007021S）、44.20mg/g（批号：1007111S）和45.04mg/g（批号：1007081S）。参考文献[1] 国家药典委员会.中国人民共和国药典[S].一部. 北京：化学工业出版社，2010：309.