桑树药材各部位中芪类成分含量的比较及其相关性研究
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[摘要] 目的：分析比较桑树药材各部位与主根根皮中芪类成分的含量，并对其相关性进行研究，为富含芪类桑树品种选育过程中使主根继续生长繁殖，而采用桑树其他部位芪类成分含量估测主根根皮的芪类成分含量提供理论依据。方法：以桑树中3个主要的芪类成分桑皮苷A、氧化白藜芦醇、白藜芦醇为指标，采用高效液相色谱法对桑树药材各部位中主要芪类成分含量进行测定，并对桑树药材各部位间及与主根根皮中的芪类成分含量进行相关与回归分析。结果： 桑树药材各部位间所含3个芪类成分含量大部分显著相关。在与主根根皮的关系中，桑树药材各部位所含氧化白藜芦醇均与主根根皮中含量显著相关；除了一年生枝条髓，各部位白藜芦醇含量均与主根根皮中含量显著相关；一年生枝条树皮与侧根所含桑皮苷A含量与主根根皮中含量显著相关。相关与回归分析显示，桑树药材各部位与主根根皮之间的桑皮苷A、氧化白藜芦醇、白藜芦醇呈显著的正相关。结论：桑树药材各部位中的芪类成分含量分布大部分显著相关，在富含芪类桑树品种选育过程中为了使主根继续生长繁殖，可以采用桑树其他部位芪类成分含量估测主根根皮的芪类成分含量。
[关键词]桑树；部位；芪类成分；高效液相色谱
桑白皮Mori Cortex为桑科桑属植物Morus alba L.的干燥根皮。桑白皮性甘、寒，归肺经，具有利水消肿、泻肺平喘功能[1]，是常用中药材之一。研究表明，桑白皮中富含氧化白藜芦醇、桑皮苷、白藜芦醇等二苯乙烯芪类物质[2-5]，此类物质具有多种生物活性（络氨酸酶抑制剂[6]，可以抑制黑色素的生成，抗炎[7]、抗疱疹[8]、抗病毒[9]、抗氧化[10]、保护神经以及在脑缺血发生时抑制细胞凋亡[11]），而备受关注。我国是蚕桑生产的发源地，拥有极其丰富的桑树种质资源，分属于15个桑种和4个变种[12-13]。因而，富含芪类药用桑优良品种选育十分必要。在富含芪类药用桑优良品种挑选过程中， 既要筛选出优良种质， 同时还要使种质继续生长繁殖。为此， 本文作者提出了用桑树其他各部位芪类成分含量来估测主根根皮芪类成分含量的解决办法。本实验采用高效液相色谱法[14]对桑树的一年生枝条木质部、一年生枝条树皮、一年生枝条髓、侧根、主根木质部、主根根皮中3个主要的芪类成分桑皮苷、氧化白藜芦醇、白藜芦醇的含量进行测定，并对桑树不同部位与主根根皮的芪类成分含量进行了相关与回归分析， 旨在为用桑树其他部位芪类成分含量估测桑树主根根皮的芪类成分含量提供理论依据。
1材料
桑树样品于2011年10月下旬采自湖南省蚕桑科学研究所桑树资源圃，采样同一品种桑树六年生，10株，每株分别采一年生枝条木质部、一年生枝条树皮、一年生枝条髓、侧根、主根木质部、主根根皮。样品自然阴干，粉碎，过40目筛，备用。
氧化白藜芦醇、桑皮苷A、白藜芦醇对照品（天津市奎青商贸有限公司）；乙腈（HPLC级，美国天地公司）；甲酸（AR级，天津市富宇精密化工仪器有限公司）；甲醇（AR级，天津市科密欧化学试剂有限公司）。
AE240 型电子天平 （Mettler Toledo 公司）；安捷伦1200高效液相色谱仪，安捷伦G1314B紫外检测器，Hypersil BDS C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm，大连依利特公司）；FW-135粉碎机（天津市泰斯特公司）。
桑树芪类成分测定样品提取液的制备：精密称取过40目筛桑样品粉1.0 g，置50 mL棕色量瓶中，加入60%甲醇（分析纯）25 mL，超声提取2次，每次40 min，合并2次的提取液，再定容于50 mL量瓶，得桑样品提取液。取桑样品提取液5 mL，过0.45 μm微孔滤膜，弃去初滤液，续滤液置EP管内，待测。
2方法与结果
2.1样品含量测定 精密称取桑树药材各部位的粉末，按照1项方法制备样品提取液，按照本实验室高效液相色谱法[14]检测含量。流动相为乙腈（A）-1.0%甲酸水溶液（B），梯度程序为0～25 min，乙腈（A）5%～30%，1.0%甲酸水溶液（B） 95%～70%，检测波长320 nm，柱温40 ℃，进样体积10 μL，流速1.0 mL·min-1。每个样品重复测定3次。记录各样品中桑皮苷A、氧化白藜芦醇、白藜芦醇的色谱峰面积，代入线性方程，计算各不同样品中3个芪类成分的含量见表1。
2.2统计方法 采用SPSS19.0统计软件对桑树药材各部位的桑皮苷A、氧化白藜芦醇、白藜芦醇含量显著性差异及其相关性进行分析。
2.3桑树药材各部位之间及与主根根皮芪类成分含量的相关性分析 桑树一年生枝条木质部、一年生枝条树皮、一年生枝条髓、侧根、主根木质部、主根根皮中3个主要的芪类成分含量相关性分析见表2～4。以桑树药材各部位含量为自变量（X），主根根皮含量为因变量（Y），对桑树药材中各部位与主根根皮芪类成分的含量进行相关与逐步回归分析，结果见表5。
由表1可知，桑皮苷A、氧化白藜芦醇、白藜芦醇分别在主根根皮、侧根与主根木质部含量最高。由表2可知，桑树药材一年生枝条树皮与侧根、主根根皮，侧根与主根根皮中桑皮苷A含量极显著相关。由表3可知，桑树药材一年生枝条木质部与主根根皮，一年生枝条髓与主根木质部，主根木质部与主根根皮氧化白藜芦醇含量显著相关。桑树药材一年生枝条木质部与一年生枝条髓，一年生枝条树皮与一年生枝条髓、侧根、主根木质部、主根根皮，一年生枝条髓与侧根、主根根皮，侧根与主根木质部、主根根皮中氧化白藜芦醇含量极显著相关。由表4可知，桑树药材一年生枝条木质部与一年生枝条树皮、侧根、主根根皮，一年生枝条树皮与侧根、主根根皮，侧根与主根根皮白藜芦醇含量极显著相关。结果表明，桑树药材各部位所含3个芪类成分含量大部分显著相关。在与主根根皮的关系中，桑树药材各部位所含氧化白藜芦醇均与主根根皮中含量显著相关；除了一年生枝条髓，各部位白藜芦醇含量均与主根根皮中含量显著相关；一年生枝条树皮与侧根所含桑皮苷A含量与主根根皮中含量显著相关。
3讨论
本实验以桑树药材各部位为研究对象，采用高效液相色谱法同时测定桑皮苷A、氧化白藜芦醇、白藜芦醇3个芪类成分的含量。结果表明，桑皮苷A、氧化白藜芦醇、白藜芦醇分别在主根根皮、侧根与主根木质部含量最高。与药典规定的药用部位基本一致。从本实验所测主要芪类成分含量来考虑，为了减免主要成分的损失，也为了简化采收工序，是否可以考虑保留侧根。
对桑树药材中各部位之间及与主根根皮芪类成分含量进行相关与逐步回归分析，结果显示，3个芪类成分含量大部分显著相关。按照逐步回归的方法，分别得到桑皮苷A、氧化白藜芦醇、白藜芦醇桑树药材各部位与主根根皮的回归方程，呈显著的正相关，这说明可以根据桑树药材其他部位芪类成分含量估测主根根皮中芪类成分含量，本研究结果可以作为富含芪类药桑品种选育中，为了使主根继续生长繁殖来保存优良种质而采用其他部位估测主根根皮中芪类成分含量提供一定的理论依据。
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Comparative and correlational studies on contents of
stilbenes in different portions of mulberry
ZHOU Jin1，2， LI Shun-xiang1，2，3*， YAN Xin-pei4*， JI Mei GUO Xiao-yi2
HUANG Dan2， 3， ZHENG Qun-yi5
（1.School of Bioscience and Technology， Hunan Agricultural University， Changsha 410128， China；
2.School of Pharmacy， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410208， China；
3.Key Lab of Chinese Materia Medica Research and Development， Hunan Academy of Chinese Medicine，
Changsha 410013， China； 4.Sercultural Sciences Institute of Hunan Province， Changsha 410127， China；
5.Natsource Chemicals （Changsha） Corporation， Changsha 410329， China）
[Abstract] Objective： To compare the contents of stilbenes in different parts and axial root bark of mulberry， and study their correlation. Method： The contents of 3 major stilbenes， mulberroside A， oxyresveratrol， and resveratrol in different parts of mulberry were determined by HPLC. The correlation and regression analysis between the contents of stilbenes in the different parts and axial root bark was carried out. Result： The contents of stilbenes in most different parts of mulberry showed significant correlation. Between the contents of stilbenes in the different parts and axial root bark， oxyresveratrol showed significant correlation among all different parts， resveratrol showed significant correlation except in spinal cord of annual branch， mulberroside A showed significant correlation between bark of annual branch， lateral root and axial root bark. The results of the correlation and regression analysis indicated that the contents of mulberroside A， oxyresveratrol， resveratrol in different parts and axial root bark were significant positively correlated. Conclusion：The contents of stilbenes are significant correlation distributed in different parts and axial root bark of mulberry. The contents of stilbenes in different parts could be used to estimate the content of the axial root bark. The result could be useful for breeding and preserving excellent germplasm at the system breed process for mulberry of rich in stilbenes.
[Key words] Morus； plant portion； stilbenes； HPLC
doi：10.4268/cjcmm20131908