氯化甲基汞对K562和C6细胞存活率影响的比较研究

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【摘要】 目的 细胞毒性试验研究氯化甲基汞和半胱氨酸氯化甲基汞混合物对k562和c6细胞存活率的影响。方法 体外培养K562和C6细胞24 h，在加入不同剂量氯化甲基汞及氯化甲基汞半胱氨酸（25、50、100 μm/L）12 h、24 h后，以MTT法检测两种细胞存活率的变化情况。结果 在两种细胞分别加入氯化甲基汞和氯化甲基汞半胱氨酸后，细胞存活率明显下降。结论 氯化甲基汞对K562和C6细胞的存活率有显著影响，半胱氨酸对氯化甲基汞导致的两种细胞存活率下降趋势无显著影响。

【关键词】 氯化甲基汞（MMC）；半胱氨酸（CYS）；细胞存活率

通讯作者：张琨 汞是重要的工业生产原料和产品，在工业中有广泛用途，作为重金属物质，其生物学危害也一直被广泛关注和研究。氯化甲基汞是汞化合物中被研究较多的物质，现已证明其能够诱导自由基的产生，改变细胞内Ca2+环境，影响蛋白质的磷酸化，干扰线粒体功能以及DNA的复制[1]。近年来有学者提出用MMC为药物治疗白血病的新方法并取得进展[2]，半胱氨酸与氯化甲基汞共轭结合有可能对抑制并杀伤肿瘤细胞有促进作用。为进一步研究氯化甲基汞及其共轭物对肿瘤细胞的影响，本次试验选取K562和C6细胞作为研究对象，比较MMC及MMCCys对两种细胞存活率的影响。

1 材料与方法

11 试剂与仪器 RPMll640、DMEM（Gibco），100 U/mL青霉素，100 U/mL链霉素，MMC（Merck），PBS、胎牛血清（杭州四季青生物工程材料研究所），MTT、胰蛋白酶（Sigma），K562及C6细胞株（ATCC）。CO2培养箱（Hepa），倒置显微镜（奥林帕斯），酶标仪（Tecan）。

12 细胞培养 K562细胞在含有10%胎牛血清的RPMI1640培养基中，37℃、5%CO2下培养箱内培养，每2 d换液传代1次，取对数生长期细胞用于试验；C6细胞在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中，37℃、5%CO2下培养箱内培养，每2～3 d胰酶消化传代1次，取对数生长期细胞用于试验。

13 MTT法检测 选择MTT比色法检测两种细胞在不同药物浓度下的细胞存活率，调节K562和C6细胞密度为5×105个/mL，分别加入不同浓度的MMC和MMCCYS，终浓度分别为25、50、100 μm/L，接触时间分别为12 h、24 h，对照组不做处理。酶标仪检测，波长分别为K562细胞490nm和C6细胞570nm，取平均值计算两种细胞存活率。

14 统计学方法 试验数据以SPSS 115统计软件进行统计分析。